PI 4-kinase α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406508

Visão geral

PI4KA codifica a fosfatidilinositol 4-quinase alfa (PI 4-quinase α), uma quinase lipídica que gera fosfatidilinositol 4-fosfato (PI4P), um precursor fundamental de fosfoinositídeos que organizam a identidade e a sinalização de membranas. A PI 4-quinase α sustenta os reservatórios de PI4P do Golgi e da membrana plasmática, influenciando o tráfego vesicular, a transdução de sinais dependente de fosfoinositídeos e a dinâmica do citoesqueleto. Pelo seu impacto na homeostase de lipídios de membrana, PI4KA é relevante para estudos de respostas ao estresse celular e do remodelamento de compartimentos endomembranares, e alterações no metabolismo de fosfoinositídeos têm sido associadas a diversos mecanismos de doenças humanas, incluindo processos de neurodesenvolvimento e oncogênicos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PI 4-kinase α (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PI4KA em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PI4KA, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PI4KA na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PI 4-kinase α.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PI4KA para a investigação da sinalização de PI 4-kinase α, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PI4KA críticos para a função PI 4-kinase α
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PI4KA para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PI 4-kinase α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo PI 4-kinase α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PI4KA. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PI 4-kinase α Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR PI 4-kinase α (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PI4KA para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PI4KA definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.