Plasmide CRISPR/Cas9 KO Phocein (h): sc-418293

Présentation

MOB4 code la protéine humaine phocean, une protéine d’échafaudage conservée impliquée dans la régulation de la signalisation de la voie Hippo via son association à des complexes liés à STRIPAK/PP2A et à des réseaux apparentés de kinases sérine/thréonine. Phocean contribue à la coordination de la polarité cellulaire, de l’organisation du cytosquelette et des processus de trafic vésiculaire qui influencent la prolifération et la migration. Par l’intermédiaire de ces plateformes de signalisation, MOB4 a été associé au contrôle de la croissance tissulaire et à des nœuds de signalisation sensibles au stress, fréquemment altérés dans des voies liées au cancer. L’étude de la fonction de phocean soutient des travaux mécanistiques sur les interactions entre voies (crosstalk) affectant l’activité de YAP/TAZ, la dynamique de phosphorylation et des décisions de destinée cellulaire dépendantes du contexte.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Phocein (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MOB4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MOB4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MOB4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Phocein.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MOB4 pour l'étude de la signalisation de Phocein, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MOB4 essentiels à la fonction de Phocein
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MOB4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Phocein plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Phocein plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MOB4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Phocein plasmide HDR (h) et le Phocein (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MOB4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MOB4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.