Plásmido CRISPR de Activación (h) PHF19: sc-408215-ACT

PHF19 (proteína con dedo PHD 19) es un regulador asociado a la cromatina que interactúa con el complejo represor Polycomb 2 (PRC2) para modular el depósito de H3K27me3 y mantener programas de represión transcripcional. A través de sus funciones de lector epigenético y de reclutamiento, PHF19 contribuye al control de la identidad celular, la proliferación y la diferenciación al moldear la accesibilidad de la cromatina y los estados de expresión génica. La desregulación de la expresión de PHF19 o de las vías de cromatina vinculadas a PRC2 se asocia con programas transcripcionales oncogénicos y con un compromiso de linaje alterado en múltiples contextos de cáncer. Como nodo del silenciamiento mediado por Polycomb, PHF19 se estudia con frecuencia por su impacto en redes génicas del desarrollo, el remodelado de la cromatina y la plasticidad transcripcional.

PHF19 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PHF19 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PHF19 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PHF19 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PHF19, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PHF19. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PHF19 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PHF19 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PHF19 en células tumorales con expresión de PHF19 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.