Partículas Lentivirales de Activación (h) PGC1a: sc-400070-LAC

PPARGC1A codifica el coactivador transcripcional PGC1a, un regulador central de la biogénesis mitocondrial y del metabolismo oxidativo que coordina los factores respiratorios nucleares, la señalización de PPAR y los programas génicos antioxidantes. PGC1a integra señales de AMPK y SIRT1 para remodelar el uso de la energía, promover la oxidación de ácidos grasos y ajustar redes transcripcionales gluconeogénicas y termogénicas de manera dependiente del tipo celular. Las alteraciones en la actividad de PPARGC1A se han vinculado con desregulación metabólica, disfunción mitocondrial y respuestas al estrés relevantes para la resistencia a la insulina, la neurodegeneración y fenotipos cardiometabólicos. En modelos celulares humanos, PPARGC1A se estudia con frecuencia para desentrañar el control transcripcional de la respiración, el manejo de especies reactivas de oxígeno y las respuestas adaptativas a señales similares a las de nutrientes y ejercicio.

Las partículas de activación lentiviral PGC1a (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PPARGC1A en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PGC1a (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PPARGC1A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PGC1a. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PPARGC1A y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.