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PGAM5慢病毒激活颗粒(m) | sc-428371-LAC | 200 µl | $455.00 |
小鼠 Pgam5 基因编码 PGAM5,这是一种锚定在线粒体上的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶,能够将线粒体质量控制与应激信号传导整合在一起。PGAM5 通过与 PINK1/Parkin 以及线粒体分裂相关机制的相互作用,调控线粒体自噬和线粒体动态,并可影响与氧化应激相关的程序性细胞死亡通路。通过调节依赖磷酸化的信号关键节点,PGAM5 将线粒体功能障碍与炎症及神经退行性变相关过程连接起来,因此是解析哺乳动物细胞应激适应机制的一个有用靶点。PGAM5 活性改变与凋亡/坏死平衡失调以及能量稳态紊乱有关,支持其在代谢性与炎症性疾病生物学模型中的相关性。
PGAM5 慢病毒激活颗粒(m)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 Pgam5 表达。
PGAM5 慢病毒激活颗粒(m)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在Pgam5转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性PGAM5表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 Pgam5 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。