Partículas Lentivirales de Activación (m) Perlecan: sc-420986-LAC

El gen murino Hspg2 codifica perlecano, un gran proteoglicano de heparán sulfato de las membranas basales y las matrices pericelulares que actúa como andamiaje para la organización de la matriz extracelular y regula la biodisponibilidad de factores de crecimiento. El perlecano modula la adhesión celular, la migración y la mecanotransducción al coordinar la señalización a través de vías como FGF, VEGF, PDGF y TGF-β, y al moldear interacciones dependientes de integrinas con lamininas y colágenos. En tejidos vasculares, esqueléticos y neurales, Hspg2 contribuye a mantener la integridad de la membrana basal e influye en la angiogénesis y la remodelación tisular. La expresión desregulada de perlecano o su depósito en la matriz se ha implicado en la fibrosis, las interacciones tumor–estroma y defectos del desarrollo, lo que lo convierte en un objetivo clave para estudiar redes de señalización de la matriz extracelular en modelos murinos.

Las partículas de activación lentiviral Perlecan (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Hspg2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Perlecan (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Hspg2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Perlecan. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Hspg2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.