Particules Lentivirales d'Activation (h) Perlecan: sc-400823-LAC

HSPG2 code la perlecan, un grand protéoglycane à héparane sulfate des membranes basales et des matrices péricellulaires, qui organise l’architecture de la matrice extracellulaire et régule l’adhérence cellule–matrice. En se liant à des facteurs de croissance tels que FGF2, VEGF et PDGF, la perlecan module des réseaux de signalisation, notamment les voies FGF/FGFR, VEGF et les voies dépendantes des intégrines, qui influencent la prolifération, la migration et l’angiogenèse. La perlecan contribue également à la mécanotransduction et à la fonction de barrière de filtration dans des tissus tels que le cartilage, le système vasculaire et les glomérules rénaux. Une expression altérée de HSPG2 ou des modifications structurales de la perlecan sont associées à la dérégulation de la matrice extracellulaire observée dans les maladies vasculaires, les dysplasies squelettiques et le remodelage du microenvironnement tumoral, ce qui en fait une cible pertinente pour les études en biologie de la matrice.

Les particules d'activation lentivirales Perlecan (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de HSPG2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Perlecan (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription HSPG2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Perlecan. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif HSPG2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.