Periostin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400744-ACT

POSTNは、結合組織に豊富に存在する分泌性のマトリセルラータンパク質であるペリオスチンをコードしており、細胞外マトリックス成分やインテグリンに結合することで、細胞接着、遊走、組織リモデリングを調節します。ペリオスチンは細胞外マトリックスの構築やメカノトランスダクションに関与し、フォーカルアドヒージョンを介したシグナル伝達および、FAK/PI3K/AKTやMAPKなどの下流経路を支持することで、線維芽細胞の活性化や上皮—間葉相互作用に影響を与えます。POSTN発現の変化は線維性リモデリングや炎症性の組織応答と関連し、間質の拡大、血管新生シグナル、転移ニッチ形成などを含む腫瘍微小環境の動態とも頻繁に結び付けられます。これらの特性により、ペリオスチンは、疾患関連モデルにおける細胞外マトリックス駆動性シグナル伝達および細胞—マトリックス間クロストークを研究するための有用な分子ツールとなります。

Periostin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性POSTNの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Periostin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における POSTN 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPOSTN転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Periostinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPOSTN遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPeriostin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPOSTN発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPeriostin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。