Per3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-411220-ACT

ヒトPER3は概日時計の構成要素であるPer3をコードしており、PASドメインを含む調節因子として、24時間周期のリズムを制御する転写—翻訳フィードバックループの協調に寄与します。PER3は（PER/CRY複合体や、CLOCK:BMAL1による転写駆動などを含む）中核的な時計機構と相互作用し、細胞周期のタイミング、代謝、ホルモンシグナル伝達、神経生理に影響するリズミックな遺伝子発現プログラムを調節します。PER3の機能や発現の変化は、睡眠—覚醒タイミングの個人差といった概日リズムの不一致（ミスアラインメント）表現型と関連しており、時計機構の破綻が神経精神医学的特性や心代謝リスクと相関する状況においても検討されてきました。そのためPER3は、ヒト細胞モデルにおける概日経路の制御、位相リセット機構、ならびに下流の振動性トランスクリプトームを解明するうえで有用な標的です。

Per3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PER3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Per3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PER3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPER3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Per3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPER3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPer3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPER3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPer3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。