Pepsin A4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-418415

概要

PGA4はペプシンA4をコードする遺伝子であり、胃粘膜で分泌型のザイモーゲン（不活性前駆体）として産生され、酸性条件下で活性化して食事由来および内因性のタンパク質を切断するアスパラギン酸エンドペプチダーゼです。ペプシンファミリーの一員として、ペプシンA4は消化管のプロテオスタシス（タンパク質恒常性）に寄与し、ペプチド産生、腔内でのタンパク質消化、ならびにその下流にある抗原および栄養素の利用可能性に影響を与えます。その活性は胃酸の生物学や粘膜バリア機構と統合されており、発現の変化やプロテアーゼバランスの変動は、胃上皮のリモデリングや炎症関連病態を扱う研究でしばしば評価されます。したがってPGA4は、胃におけるプロテアーゼ依存的経路の解明や、胃疾患の文脈におけるバイオマーカー志向の研究において重要な標的となります。

Pepsin A4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPGA4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PGA4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PGA4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Pepsin A4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Pepsin A4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PGA4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Pepsin A4の機能に不可欠なPGA4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PGA4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Pepsin A4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPepsin A4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PGA4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Pepsin A4 HDRプラスミド（h）および Pepsin A4 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPGA4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPGA4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。