PDK3 Plasmide Double Nickase (h): sc-404502-NIC

PDK3 codifica la chinasi della piruvato deidrogenasi isoforma 3, una chinasi mitocondriale Ser/Thr che fosforila e inibisce il complesso della piruvato deidrogenasi, limitando così la conversione del piruvato in acetil-CoA e deviando il flusso di carbonio lontano dal ciclo dell’acido tricarbossilico (TCA). Attraverso questo punto di controllo, PDK3 integra la disponibilità di nutrienti e la segnalazione dell’ipossia con l’ossidazione del glucosio, la produzione di lattato e, più in generale, con la bioenergetica mitocondriale. Un’attività di PDK3 deregolata è stata collegata a una riprogrammazione metabolica patologica e a un’alterazione dell’equilibrio redox, con associazioni riportate con il metabolismo delle cellule tumorali e con disturbi neuromuscolari e dei nervi periferici. In quanto regolatore del metabolismo ossidativo, PDK3 è spesso studiata in contesti che coinvolgono risposte allo stress mitocondriale, dipendenza dalla glicolisi e adattamento metabolico.

PDK3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PDK3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PDK3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PDK3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PDK3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.