PDIR Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405741

Visão geral

PDIA5 codifica a proteína humana relacionada à isomerase de dissulfeto de proteínas PDIR, uma oxidorredutase residente no retículo endoplasmático (RE) que dá suporte ao dobramento oxidativo de proteínas e à isomerização de ligações dissulfeto. Como membro da família das isomerases de dissulfeto de proteínas (PDI), a PDIR contribui para a proteostase do RE ao facilitar a maturação de proteínas secretadas e de membrana e ao coordenar-se com redes de chaperonas recrutadas durante a resposta a proteínas mal dobradas (UPR). A atividade de PDIA5 se conecta ao controle de qualidade do RE, à homeostase redox e à degradação associada ao RE (ERAD), processos frequentemente remodelados no câncer, no estresse metabólico e em contextos neurodegenerativos. Alterações na função da família PDI são comumente associadas ao aumento da sinalização de estresse do RE e a mudanças na capacidade da via secretória, tornando PDIA5 um ponto útil para estudos mecanísticos do dobramento dependente de redox.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PDIR (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PDIA5 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PDIA5, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PDIA5 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PDIR.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PDIA5 para a investigação da sinalização de PDIR, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PDIA5 críticos para a função PDIR
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PDIA5 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PDIR Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo PDIR Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PDIA5. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PDIR Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR PDIR (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PDIA5 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PDIA5 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.