PDGF Receptor beta/PDGFRB Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400187-ACT

PDGFRB codifica il recettore beta del fattore di crescita derivato dalle piastrine (PDGFRβ), una tirosin-chinasi recettoriale che lega PDGF-BB e ligandi correlati per regolare la proliferazione, la sopravvivenza e la migrazione delle cellule mesenchimali. Una volta attivato, PDGFRβ avvia l’autofosforilazione e propaga la segnalazione attraverso le vie PI3K–AKT, RAS–MAPK, PLCγ–PKC e STAT, coordinando il rimodellamento del citoscheletro e le interazioni con la matrice extracellulare. Questo recettore è centrale nello sviluppo vascolare e nel reclutamento dei periciti, favorendo la stabilizzazione dei vasi e i processi di riparazione tissutale. Una segnalazione PDGFRB deregolata o fusioni aberranti di PDGFRB sono implicate in stati fibroproliferativi, angiogenesi patologica e crosstalk tumore–stroma, rendendolo un bersaglio chiave per studi meccanicistici della biologia stromale.

PDGF Receptor beta/PDGFRB Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PDGFRB senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PDGF Receptor beta/PDGFRB Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PDGFRB nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PDGFRB, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PDGF Receptor beta/PDGFRB. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PDGFRB nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PDGF Receptor beta/PDGFRB nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PDGF Receptor beta/PDGFRB nelle cellule tumorali con espressione di PDGFRB silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.