PDGF-B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400586

概要

PDGFBは、血小板由来増殖因子サブユニットB（PDGF-B）をコードしており、分泌型のマイトジェンとして活性型PDGF二量体を形成し、主としてPDGF受容体型チロシンキナーゼを介してシグナル伝達を行うことで、ペリサイトのリクルート、血管成熟、ならびに間葉系細胞の増殖を制御します。PDGF-BによるシグナルはMAPK/ERK、PI3K–AKT、PLCγ経路を動員し、間質および血管コンパートメントにおける細胞骨格リモデリング、走化性、細胞外マトリックス（ECM）沈着を形成します。PDGFB発現の異常やPDGF軸の活性化は、病的血管新生、線維性リモデリング、そして多様ながん微小環境で認められるPDGF依存性の自己分泌／傍分泌的な増殖回路に関与するとされています。その結果、PDGFBは、内皮細胞—ペリサイト間コミュニケーション、創傷修復の生物学、ならびに組織リモデリングとがん生物学に関連する間質シグナル伝達ネットワークの研究で広く注目されています。

PDGF-B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPDGFB遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PDGFB内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PDGFBのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PDGF-Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PDGF-Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PDGFB欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PDGF-Bの機能に不可欠なPDGFBエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PDGFBゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PDGF-B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPDGF-B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PDGFB遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PDGF-B HDRプラスミド（h）および PDGF-B HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPDGFBホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPDGFB標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。