PDGF-A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400711

Panoramica

PDGFA codifica il fattore di crescita derivato dalle piastrine A (PDGF-A), un fattore di crescita dimerico secreto che segnala principalmente attraverso PDGFRα per regolare la proliferazione, la migrazione e la sopravvivenza delle cellule mesenchimali. PDGF-A è un driver chiave delle risposte mitogene e chemiotattiche che interagiscono con le vie di segnalazione MAPK/ERK e PI3K/AKT, contribuendo al rimodellamento della matrice extracellulare, al supporto angiogenico e al crosstalk tra stroma ed epitelio. Una segnalazione PDGF-A/PDGFR deregolata è stata implicata nel rimodellamento fibrotico e nell’attivazione dello stroma associato ai tumori, ed è spesso studiata per i suoi effetti sul controllo del ciclo cellulare e sulla dinamica del microambiente tissutale. PDGFA è rilevante anche per processi di sviluppo e per modelli di riparazione delle ferite, in cui gradienti paracrini di fattori di crescita influenzano il destino cellulare e la motilità.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PDGF-A (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PDGFA in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PDGFA insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PDGFA a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PDGF-A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PDGFA per lo studio della segnalazione di PDGF-A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PDGFA critici per la funzione di PDGF-A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PDGFA per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PDGF-A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PDGF-A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PDGFA. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PDGF-A Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PDGF-A (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PDGFA per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PDGFA definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.