PDE5A Double Nickaseプラスミド (h): sc-401627-NIC

PDE5Aはホスホジエステラーゼ5Aをコードしており、cGMP特異的ホスホジエステラーゼとして、環状GMP（cGMP）をGMPに加水分解することで一酸化窒素（NO）–cGMPシグナル伝達を終結させます。cGMP濃度を制御することにより、PDE5AはプロテインキナーゼG（PKG）の活性および、平滑筋トーヌス、血管反応性、血小板機能、心臓リモデリング応答などの下流過程を調節します。PDE5A活性は、グアニル酸シクラーゼの出力をカルシウム制御や細胞骨格ダイナミクスと統合するシグナルネットワークと結びついており、細胞の収縮性や増殖に影響を与えます。PDE5Aの発現異常やシグナルのバランス破綻は、心血管系および肺血管系の病態生理、線維化に関連するリモデリングなど、cGMP恒常性の変化が疾患関連表現型に寄与するさまざまな状況で研究されています。

PDE5A ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PDE5A 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PDE5A内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PDE5Aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PDE5Aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。