Pdcd-1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-422150-LAC

O gene Pdcd1 de camundongo codifica a Pdcd-1 (PD-1), um receptor inibitório de checkpoint imunológico induzido em células T ativadas, células B e populações mieloides, que limita a sinalização do receptor de antígeno para manter a tolerância periférica. Após a ligação a PD-L1 ou PD-L2, o PD-1 recruta a fosfatase SHP2 para atenuar a sinalização proximal de TCR/CD28 e as vias downstream PI3K–AKT–mTOR e RAS–MAPK, reduzindo a proliferação, a produção de citocinas e a aptidão metabólica. A expressão de Pdcd1 é uma marca da exaustão de células T durante exposição crônica a antígenos e modula a dinâmica do centro germinativo, influenciando a regulação imune em infecção, inflamação e evasão imune associada a tumores. Em modelos murinos, Pdcd1 é frequentemente investigado para dissecar a biologia de checkpoints, a diferenciação de células imunes e os mecanismos de hipo-responsividade funcional.

As Partículas de Ativação Lentivirais Pdcd-1 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Pdcd1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Pdcd-1 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Pdcd1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Pdcd-1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Pdcd1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.