Plásmido CRISPR de Activación (h) PC-PLD1: sc-402528-ACT

El gen humano **PLD1** codifica la fosfolipasa D1 (PC-PLD1), una enzima asociada a la membrana que hidroliza la fosfatidilcolina para generar ácido fosfatídico, un segundo mensajero lipídico que regula el tráfico de membranas, la remodelación del citoesqueleto y la secreción de vesículas. El ácido fosfatídico derivado de PLD1 influye en vías de transducción de señales, incluidas mTOR y redes de pequeñas GTPasas (ARF y la familia Rho), moldeando así la endocitosis, la exocitosis y el reciclaje de receptores. Por sus funciones en la activación plaquetaria, la señalización inflamatoria y las respuestas impulsadas por factores de crecimiento, PLD1 se ha estudiado en contextos como la invasión de células tumorales, la biología de la trombosis y la neuroinflamación. La actividad alterada de PLD1 y la dinámica de la señalización lipídica también se asocian con cambios en la autofagia y en las respuestas al estrés mitocondrial, lo que la convierte en una diana útil para estudios mecanísticos de la homeostasis celular.

PC-PLD1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PLD1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PC-PLD1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PLD1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PLD1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PC-PLD1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PLD1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PC-PLD1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PC-PLD1 en células tumorales con expresión de PLD1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.