PC-PLD1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402528-ACT

ヒトPLD1は、ホスホリパーゼD1（PC-PLD1）をコードしており、これは膜結合型酵素としてホスファチジルコリンを加水分解し、膜輸送、細胞骨格再編成、ならびに小胞分泌を制御する脂質のセカンドメッセンジャーであるホスファチジン酸を産生する。PLD1由来のホスファチジン酸は、mTORや小型GTPアーゼ（ARFおよびRhoファミリー）ネットワークを含むシグナル伝達経路に影響を与え、その結果、エンドサイトーシス、エキソサイトーシス、受容体リサイクリングの在り方を規定する。血小板活性化、炎症性シグナル、成長因子駆動性応答における役割を通じて、PLD1は腫瘍細胞の浸潤、血栓形成の生物学、神経炎症などの文脈で研究されてきた。さらに、PLD1活性や脂質シグナルのダイナミクスの変化は、オートファジーやミトコンドリアのストレス応答の変容とも関連しており、細胞恒常性の機構研究における有用な標的となっている。

PC-PLD1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PLD1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PC-PLD1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PLD1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPLD1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PC-PLD1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPLD1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPC-PLD1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPLD1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPC-PLD1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。