Particules Lentivirales d'Activation (h) PATZ1: sc-404881-LAC

PATZ1 (zinc finger 1 contenant des domaines POZ/BTB et AT-hook) est un facteur de transcription nucléaire qui se lie à l’ADN riche en motifs AT et interagit avec des complexes de régulation de la chromatine afin de moduler des programmes d’expression génique contrôlant la prolifération, la différenciation et l’apoptose. Grâce à son domaine BTB/POZ et à ses modules de liaison à l’ADN de type doigt de zinc, PATZ1 participe à la répression et à l’activation transcriptionnelles, influençant le contrôle du cycle cellulaire, l’engagement de lignée et les voies de réponse au stress. Des altérations de l’expression ou de la fonction de PATZ1 ont été associées à des phénotypes oncogéniques et développementaux, notamment à des réseaux transcriptionnels dérégulés qui affectent la biologie tumorale et la plasticité cellulaire. En tant que régulateur dépendant du contexte, PATZ1 constitue un point d’entrée utile pour disséquer les circuits pilotés par des facteurs de transcription, le contrôle épigénétique et la robustesse des réseaux de gènes dans les cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PATZ1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PATZ1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PATZ1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PATZ1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PATZ1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PATZ1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.