PARP-14 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402812-ACT

A PARP14 humana (PARP-14; ARTD8) é uma mono-ADP-ribosiltransferase que catalisa a ADP-ribosilação de proteínas-alvo para modular programas transcricionais, a transdução de sinais e as interações proteína–proteína. Atua em contextos nucleares e citoplasmáticos, integrando sinais de vias de citocinas e respostas ao estresse para influenciar a diferenciação de células imunes, a expressão de genes inflamatórios e a regulação metabólica. A PARP-14 tem sido associada ao controle transcricional dependente de STAT, a vias relacionadas ao interferon e à regulação de complexos associados a RNA e à cromatina. A desregulação da atividade ou da expressão de PARP14 tem sido associada a alterações na sinalização imune e tem sido estudada no contexto de inflamação, fibrose e biologia tumoral como um nó que conecta respostas a citocinas ao output transcricional.

PARP-14 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PARP14 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PARP-14 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PARP14 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PARP14, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PARP-14. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PARP14 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PARP-14 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PARP-14 em células tumorais com expressão de PARP14 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.