PAR-2 Plasmide Double Nickase (h): sc-400333-NIC

F2RL1 codifica il recettore attivato da proteasi-2 (PAR-2), un recettore accoppiato a proteine G attivato dal clivaggio mediato da proteasi seriniche che smaschera un ligando "tethered" (ancorato). La segnalazione di PAR-2 coinvolge le vie di Gq/11 e della β-arrestina, inducendo flussi intracellulari di Ca²⁺, attivazione di MAPK/ERK, trascrizione dipendente da NF-κB e rimodellamento del citoscheletro, modulando la segnalazione infiammatoria e le risposte della barriera epiteliale. È implicato nel crosstalk con la coagulazione e con reti di proteasi correlate alle callicreine, collegando la proteolisi extracellulare alla produzione di citochine e al reclutamento leucocitario. Un'attività deregolata di PAR-2 è stata associata a processi infiammatori e fibrotici, alla segnalazione del dolore e del prurito e alle interazioni tumore–microambiente rilevanti per la biologia del cancro.

PAR-2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus F2RL1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di F2RL1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di F2RL1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con F2RL1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.