PAR-2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400333-ACT

F2RL1 はプロテアーゼ活性化受容体2（PAR-2）をコードしている。PAR-2 は G タンパク質共役型受容体（GPCR）であり、セリンプロテアーゼによる切断によって係留リガンド（tethered ligand）が露出することで活性化され、細胞内シグナル伝達が開始される。PAR-2 は Gαq/11、Gαi/o、Gα12/13 と共役し、ホスホリパーゼCを介した Ca2+ フラックス、RhoA による細胞骨格リモデリング、MAPK/ERK カスケード、ならびに NF-κB 依存性転写を制御することで、炎症応答およびバリア機能応答を形成する。この受容体は上皮・内皮コンパートメントに加えて免疫細胞にも広く発現しており、細胞外プロテアーゼ活性をサイトカイン放出、白血球トラフィッキング、侵害受容性シグナルへと結び付ける。PAR-2 シグナルの異常は、慢性炎症、線維化、気道過敏性、掻痒、腫瘍関連微小環境のリモデリングに関与するとされており、プロテアーゼ駆動経路の機構解析における有用な標的となる。

PAR-2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性F2RL1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PAR-2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における F2RL1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はF2RL1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PAR-2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のF2RL1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPAR-2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびF2RL1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPAR-2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。