PAPP-A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422113

Panoramica

Il gene murino **Pappa** codifica la *pregnancy-associated plasma protein A* (PAPP-A), una metalloproteinasi secreta che scinde le proteine leganti i fattori di crescita insulino-simili (IGF-binding proteins), in particolare **IGFBP4**, aumentando la biodisponibilità locale degli IGF. Modulando la segnalazione **IGF1/IGF2** attraverso **IGF1R** e le cascate a valle **PI3K–AKT** e **MAPK**, PAPP-A influenza la proliferazione cellulare, la sopravvivenza, la differenziazione e il rimodellamento della matrice extracellulare. L’attività di PAPP-A è stata associata a processi quali la biologia placentare e riproduttiva, il comportamento della muscolatura liscia vascolare e la riparazione tissutale, rendendola rilevante per studi meccanicistici sulla regolazione della crescita e sul rimodellamento associato all’infiammazione. Una regolazione alterata dell’asse IGF che coinvolge PAPP-A è spesso analizzata in modelli di disfunzione metabolica, patologia cardiovascolare e interazioni stromali associate al cancro, senza implicare esiti clinici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PAPP-A (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pappa in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pappa insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pappa a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PAPP-A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pappa per lo studio della segnalazione di PAPP-A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Pappa critici per la funzione di PAPP-A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pappa per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PAPP-A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PAPP-A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pappa. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PAPP-A Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PAPP-A (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pappa per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pappa definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.