Plasmide CRISPR d'Activation (h) Pannexin-1: sc-401635-ACT

PANX1 code la pannexine‑1, un canal à large pore de la membrane plasmique qui permet la libération d’ATP et de métabolites afin de coordonner la signalisation purinergique et la communication paracrine. L’activité de la pannexine‑1 est couplée à la dépolarisation membranaire, au stress mécanique et aux signaux inflammatoires, influençant la dynamique du Ca²⁺, la signalisation associée à l’inflammasome et le remodelage du cytosquelette. En régulant le tonus des nucléotides extracellulaires et les signaux « find‑me » lors de l’apoptose, PANX1 contribue au recrutement des cellules immunitaires, à la migration cellulaire et à l’homéostasie tissulaire. Une signalisation PANX1 dérégulée a été associée dans la littérature à la neuroinflammation, aux voies liées à la douleur, aux réponses aux lésions dues à l’ischémie et aux interactions au sein du microenvironnement tumoral–immunitaire, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique dans des modèles pertinents pour les maladies.

Pannexin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PANX1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Pannexin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PANX1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PANX1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Pannexin-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PANX1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Pannexin-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Pannexin-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de PANX1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.