Plasmide CRISPR d'Activation (h) PAI-1/SERPINE1: sc-400300-ACT

SERPINE1 code l’inhibiteur de l’activateur du plasminogène de type 1 (PAI‑1), une serpine sécrétée qui inhibe les activateurs du plasminogène de type tissulaire et de type urokinase afin de limiter la génération de plasmine et la fibrinolyse. En contrôlant la protéolyse péricellulaire, PAI‑1 influence le renouvellement de la matrice extracellulaire, l’adhésion et la migration cellulaires, ainsi que des programmes de remodelage tissulaire qui recoupent la signalisation du TGF‑β et des signaux inflammatoires. L’expression de SERPINE1 est régulée de manière dynamique lors de la sénescence et des réponses au stress associées à l’hypoxie, modulant l’équilibre des protéases dans les microenvironnements vasculaires et stromaux. Une activité dérégulée de PAI‑1 a été associée à des phénotypes thrombotiques et fibrosants ainsi qu’à des processus de remodelage liés aux tumeurs, ce qui étaye les études mécanistiques sur la protéostasie et la biologie de la matrice.

PAI-1/SERPINE1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SERPINE1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PAI-1/SERPINE1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SERPINE1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SERPINE1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PAI-1/SERPINE1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SERPINE1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PAI-1/SERPINE1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PAI-1/SERPINE1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SERPINE1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.