Partículas Lentivirales de Activación (h) PADI2: sc-403349-LAC

PADI2 codifica la peptidilarginina deiminasa 2 (PAD2), una enzima dependiente de calcio que cataliza la citrulinación de residuos de arginina en proteínas, alterando su carga, estructura e interacciones proteína–proteína. La actividad de PAD2 influye en la organización de la cromatina y en la regulación transcripcional mediante la citrulinación de histonas, y modula proteínas del citoesqueleto y de señalización inmunitaria que determinan la diferenciación celular y las respuestas inflamatorias. La expresión o actividad desregulada de PADI2 se ha vinculado con la activación inmunitaria aberrante y la remodelación epigenética observadas en trastornos autoinmunes e inflamatorios, y también se estudia por sus posibles funciones en programas transcripcionales asociados a tumores. En consecuencia, PADI2 es un nodo útil para investigar vías de modificaciones postraduccionales, la señalización inmunitaria innata/adaptativa y las redes de regulación génica en células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PADI2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PADI2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PADI2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PADI2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PADI2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PADI2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.