PADI2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-422175-ACT

Il gene murino **Padi2** codifica la peptidilarginina deiminasi 2 (PADI2), un enzima calcio-dipendente che catalizza la citrullinazione delle proteine, convertendo i residui di arginina in citrullina e modificando carica, struttura e reti di interazione proteiche. L’attività di PADI2 modula la cromatina e i programmi trascrizionali attraverso la citrullinazione degli istoni e di altri substrati nucleari, e influisce anche sulla funzione di proteine citoscheletriche ed extracellulari in contesti di differenziamento e di segnalazione infiammatoria. Una citrullinazione deregolata è stata collegata alla generazione di autoantigeni e a un’attivazione immunitaria aberrante, e PADI2 è spesso studiata in vie che connettono immunità innata, regolazione epigenetica e risposte allo stress cellulare. Nei modelli murini, la perturbazione di **Padi2** viene utilizzata per indagare la polarizzazione delle cellule immunitarie, il rimodellamento epiteliale e i meccanismi che accoppiano le modifiche post-traduzionali allo stato di regolazione genica.

PADI2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Padi2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PADI2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Padi2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Padi2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PADI2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Padi2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PADI2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PADI2 nelle cellule tumorali con espressione di Padi2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.