Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
PACAP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (r): sc-437378
- Especies Diana: rat
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- PACAP El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (r) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico PACAP, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PACAP Anticuerpo (F-2): sc-166180
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
PACAP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (r) | sc-437378 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El polipéptido activador de la adenilato ciclasa hipofisaria (PACAP; Adcyap1) es un neuropéptido conservado que señaliza principalmente a través del receptor PAC1 y también puede activar los receptores VPAC para regular la transcripción dependiente de cAMP/PKA y de MAPK/ERK. En los sistemas nervioso y neuroendocrino de la rata, PACAP modula la excitabilidad neuronal, la liberación de neurotransmisores, la señalización del eje del estrés y programas del desarrollo, incluido el crecimiento de neuritas y la supervivencia celular. La señalización impulsada por PACAP se cruza con la homeostasis del calcio, la plasticidad sináptica y la regulación de mediadores inflamatorios, vinculando esta vía con mecanismos relevantes para el procesamiento del dolor, las conductas relacionadas con el estrés y la neuroinflamación. La desregulación de la actividad de PACAP se ha asociado con alteraciones del control autonómico y metabólico y se ha investigado en modelos de fenotipos tipo migraña y de vulnerabilidad a la neurodegeneración.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO PACAP (r) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen en líneas celulares rat. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PACAP.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en para la investigación de la señalización de PACAP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de críticos para la función de PACAP
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido PACAP CRISPR/Cas9 KO (r) y el plásmido PACAP CRISPR/Cas9 KO (r2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus . Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PACAP (r) y el plásmido HDR PACAP (r2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.