PACAP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419000

概要

Adcyap1 は下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド（PACAP）をコードしており、PACAP は保存性の高い神経ペプチドです。PACAP は主として PAC1（ADCYAP1R1）および関連するクラスB GPCR を介してシグナルを伝え、cAMP/PKA、MAPK/ERK、細胞内 Ca²⁺ 経路を制御します。マウス組織では、PACAP は神経伝達、神経発生、神経内分泌分泌、細胞ストレス応答を調節し、シナプス可塑性、概日リズムや視床下部の恒常性、自律神経調節に影響します。PACAP シグナルは、神経系および末梢の区画におけるサイトカイン放出や細胞生存シグナルを形作ることで、炎症および代謝プログラムとも交差します。ADCYAP1/PACAP 軸の制御異常は、文献上、ストレス関連神経生物学、疼痛処理、神経炎症機構と関連づけられており、神経系および免疫関連の文脈における機序研究を支持しています。

PACAP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAdcyap1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Adcyap1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Adcyap1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PACAPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PACAPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Adcyap1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PACAPの機能に不可欠なAdcyap1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Adcyap1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PACAP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPACAP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Adcyap1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PACAP HDRプラスミド（m）および PACAP HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAdcyap1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAdcyap1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。