Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PABP Double Nickaseプラスミド (h): sc-400688-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- PABP Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- PABPダブルニカースプラスミド（h）およびPABPダブルニカースプラスミド（h2）は、PABPC1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: PABP 抗体 (10E10): sc-32318
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
PABP Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400688-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PABP Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400688-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトのPABPC1は、mRNAのpoly(A)テールに結合してそれを被覆し、翻訳開始、mRNAの安定化、およびデアデニル化依存的な分解を協調的に制御する中核的なRNA結合因子であるpoly(A)結合タンパク質（PABP）をコードしている。PABPはeIF4Gをはじめとする翻訳装置との相互作用を介してmRNAの環状化を促進し、タンパク質合成速度を調節すると同時に、miRNA介在性サイレンシングやストレス顆粒の動態にも影響を与える。PABPに依存した転写産物の運命制御は、PABPC1を細胞増殖、ストレス応答、RNA品質管理を司る経路と結び付ける。RNA代謝および翻訳制御の破綻は、がん生物学や神経変性に関連する表現型においてPABPC1関連プロセスの関与を示唆しており、これらではmRNA安定性やプロテオスタシスの変化が共通の特徴としてみられる。
PABP ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PABPC1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PABPC1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PABPC1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PABPC1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。