PABP Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400688-NIC

O gene humano PABPC1 codifica a proteína ligante de poli(A) (PABP), um fator central de ligação a RNA que recobre as caudas poli(A) de mRNAs e coordena o início da tradução, a estabilização do mRNA e a degradação dependente de deadenilação. Por meio de interações com eIF4G e outros componentes da maquinaria de tradução, a PABP promove a circularização do mRNA e regula as taxas de síntese proteica, além de influenciar o silenciamento mediado por miRNAs e a dinâmica de grânulos de estresse. O controle, dependente de PABP, do destino dos transcritos conecta o PABPC1 a vias que governam o crescimento celular, respostas ao estresse e controle de qualidade de RNA. A desregulação do metabolismo de RNA e do controle translacional implica processos associados ao PABPC1 na biologia do câncer e em fenótipos relevantes para neurodegeneração, nos quais a estabilidade alterada de mRNAs e a proteostase são características comuns.

PABP O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus PABPC1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de PABPC1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função PABPC1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com PABPC1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.