p73 Plasmídeo duplo de Nickase (m2): sc-423511-NIC-2
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- p73O plasmídeo de dupla Nickase (m2) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase p73 (m2) e o Plasmídeo Double Nickase p73 (m22) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Trp73. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:p73 Anticorpo (5B429): sc-56191
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
p73 Plasmídeo duplo de Nickase (m2) | sc-423511-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O gene Trp73 do camundongo codifica a p73, um fator de transcrição da família p53 que regula programas responsáveis pela parada do ciclo celular, pela apoptose e pela estabilidade genômica por meio da ativação, dependente do contexto, de genes-alvo envolvidos em respostas a danos no DNA. A p73 também contribui para processos do desenvolvimento, incluindo a neurogênese e a diferenciação epitelial, e interage com redes de sinalização como a transcrição dirigida por E2F, a regulação associada ao TGF-β e vias de quinases ativadas por estresse. A desregulação do equilíbrio entre isoformas de Trp73 e da transcrição mediada por p73 tem sido associada a alterações nas funções supressoras de tumor, instabilidade cromossômica e defeitos na homeostase tecidual relevantes para a biologia do câncer e para fenótipos do desenvolvimento. A edição gênica de Trp73 em modelos murinos sustenta estudos mecanísticos da função específica de isoformas, dos circuitos transcricionais e das interações entre vias que fundamentam respostas ao estresse e estados celulares associados a doenças.
p73 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m2) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Trp73 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Trp73. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Trp73. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Trp73 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.