p57 Kip2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400444-ACT

CDKN1C codifica a p57 Kip2, um inibidor de quinases dependentes de ciclina da família CIP/KIP, sujeito a imprinting, que restringe a atividade de CDK2 e CDK1 para impor a paragem em G1 e coordenar programas de diferenciação. A p57 Kip2 integra sinais de vias do desenvolvimento e de fatores de crescimento, incluindo entradas das vias TGF-β/SMAD e do eixo PI3K–AKT, para modular checkpoints do ciclo celular, compromisso de linhagem e controlo do crescimento tecidual. A desregulação da expressão de CDKN1C e defeitos de imprinting estão associados a proliferação aberrante e a perturbações do desenvolvimento, e níveis alterados de p57 Kip2 são frequentemente estudados em contextos como biologia do cancro, quiescência de células estaminais e desenvolvimento placentário. Como regulador nuclear da proliferação, a p57 Kip2 também é relevante para a regulação epigenética no cluster de imprinting 11p15 e para vias que governam a senescência e transições de destino celular.

p57 Kip2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CDKN1C sem alterar a sequência de ADN subjacente.

p57 Kip2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CDKN1C em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CDKN1C, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de p57 Kip2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CDKN1C nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de p57 Kip2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via p57 Kip2 em células tumorais com expressão de CDKN1C silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.