p55 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-409649-ACT

ヒトMPP1は、膜パルミトイル化タンパク質p55をコードしている。p55はMAGUKファミリーに属する足場（スキャフォールド）因子で、膜関連タンパク質複合体の編成を助け、それらを細胞皮質のアクチン–スペクトリン細胞骨格へ連結する。p55は、FERMドメインタンパク質や他の細胞骨格アダプターとの相互作用を介して、接着部位の安定性および膜ドメインの構築に関与し、細胞形状、極性、ならびにトラフィッキングに影響を与える。赤血球では、MPP1が膜の機械的完全性や特殊なマイクロドメインの組織化に寄与しており、これらの過程は赤血球の変形能や膜安定性に関わる表現型と関連する。p55依存的な足場機能の変化は、細胞骨格への係留や細胞間接触の制御が乱れる状況で検討されており、正常時および疾患関連状態における膜組織化を研究するための枠組みを提供している。

p55 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MPP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

p55 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MPP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMPP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性p55の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMPP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるp55依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMPP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるp55経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。