P4HA2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405566

Visão geral

P4HA2 codifica a subunidade catalítica alfa-2 da prolil 4-hidroxilase, uma enzima-chave do retículo endoplasmático necessária para a hidroxilação de resíduos de prolina no colágeno e em outras proteínas da matriz extracelular. Essa modificação pós-traducional promove o dobramento adequado e a estabilidade da tripla hélice, conectando a atividade de P4HA2 à biossíntese de colágeno, ao controle de qualidade de proteínas no RE e à organização da matriz extracelular. Por seu papel na deposição e no remodelamento da matriz, P4HA2 é frequentemente estudado em vias relacionadas a interações célula–matriz, rigidez tecidual e regulação do comportamento celular pelo microambiente. A expressão desregulada de P4HA2 tem sido associada a remodelamento fibrótico e a alterações estromais associadas a tumores, tornando-o um alvo relevante para estudos mecanísticos de fenótipos impulsionados pela matriz.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO P4HA2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene P4HA2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do P4HA2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do P4HA2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína P4HA2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de P4HA2 para a investigação da sinalização de P4HA2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) P4HA2 críticos para a função P4HA2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos P4HA2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo P4HA2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo P4HA2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus P4HA2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo P4HA2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR P4HA2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia P4HA2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo P4HA2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.