P2Y9 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-429620

概要

Lpar4は、プリン作動性受容体P2Y9をコードする遺伝子であり、細胞外ヌクレオチド／脂質によって媒介されるシグナル伝達（細胞間コミュニケーション、膜近傍のセカンドメッセンジャー・カスケード、状況依存的な運動性および分化の制御など）に関与するGタンパク質共役型受容体（GPCR）です。マウスの系では、P2Yファミリーのシグナルは一般に、細胞内カルシウム動態、cAMPバランス、ならびに細胞骨格リモデリングと転写応答を協調させる下流のキナーゼネットワークを制御する経路へと収束します。そのため、Lpar4／P2Y9の活性は、免疫細胞のトラフィッキング、間質—上皮間クロストーク、組織恒常性の研究において重要です。GPCR駆動のプリン作動性シグナルの破綻は、炎症性・線維化の表現型や成長シグナルの変調と関連づけられており、Lpar4は機序解明を目的とした経路解析に有用なノードとなります。

P2Y9 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるLpar4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Lpar4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Lpar4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、P2Y9タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、P2Y9シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Lpar4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• P2Y9の機能に不可欠なLpar4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Lpar4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• P2Y9 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびP2Y9 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Lpar4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  P2Y9 HDRプラスミド（m）および P2Y9 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはLpar4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のLpar4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。