P2Y2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422096
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- P2Y2 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico P2Y2, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: P2Y2 Anticuerpo (H-5): sc-518121
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
P2Y2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422096 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
P2ry2 codifica el receptor P2Y2 de ratón, un receptor purinérgico acoplado a proteína G que se activa por ATP y UTP extracelulares. La señalización de P2Y2 se acopla principalmente a Gq/11 para estimular la fosfolipasa C, la producción de inositol fosfato, la movilización intracelular de Ca²⁺ y la activación de las vías MAPK y PI3K/AKT aguas abajo, modulando respuestas transcripcionales y del citoesqueleto. A través de la regulación del transporte iónico, la quimiotaxis y la secreción, P2Y2 contribuye a la fisiología de la barrera epitelial, a las respuestas endoteliales y a la señalización inmunitaria innata en microambientes inflamatorios. La señalización purinérgica desregulada en la que participa P2Y2 se ha asociado con inflamación de las vías respiratorias y del intestino, remodelado relacionado con fibrosis e interacciones estromales e inmunitarias asociadas a tumores, lo que respalda su relevancia en estudios de mecanismos de enfermedad.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO P2Y2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen P2ry2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del P2ry2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de P2ry2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína P2Y2.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en P2ry2 para la investigación de la señalización de P2Y2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de P2ry2 críticos para la función de P2Y2
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de P2ry2 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido P2Y2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido P2Y2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus P2ry2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR P2Y2 (m) y el plásmido HDR P2Y2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología P2ry2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana P2ry2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.