P2X7 Lentiviral Activation Particles (h2): sc-400780-LAC-2

Das humane Gen P2RX7 kodiert den purinergen Rezeptor P2X7, einen ATP-gesteuerten Kationenkanal, der Na⁺- und Ca²⁺-Einstrom sowie K⁺-Ausstrom vermittelt und dadurch Membrandepolarisation, Zytokinreifung und bei anhaltender Stimulation die Bildung großer Poren reguliert, die mit Zelltodprogrammen verknüpft ist. P2X7 ist ein zentraler Modulator der angeborenen Immunantwort, indem er die Wahrnehmung extrazellulären ATPs mit der Aktivierung des Inflammasoms (einschließlich NLRP3), der caspase-1-abhängigen Prozessierung von IL‑1β/IL‑18 und nachgeschalteten Antworten der NF‑κB- und MAPK-Signalwege in myeloiden Zellen, Mikroglia und weiteren immunrelevanten Zellpopulationen koppelt. Eine fehlregulierte Aktivität und Expression von P2RX7 wurde mit chronischer Entzündung und neuroinflammatorischen Prozessen sowie mit veränderter Immunzellfunktion in onkologischen und autoimmunen Zusammenhängen in Verbindung gebracht. Die Geneditierung von P2RX7 ermöglicht mechanistische Untersuchungen der purinergen Signalübertragung, der Freisetzung inflammatorischer Mediatoren, der Regulation des Immunzell-Phänotyps und der reizabhängigen Zytotoxizität in physiologisch relevanten Zellmodellen.

P2X7 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente P2RX7-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

P2X7 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der P2RX7-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen P2X7-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen P2RX7-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.