P2X6 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416264-ACT

ヒトP2RX6は、細胞外ヌクレオチドに応答して急速な陽イオン流入を媒介するATP作動性P2XイオンチャネルのサブユニットであるP2X6をコードする。P2X6はヘテロマー型チャネル複合体の形成に寄与し、プリン作動性神経伝達や免疫調節に関連するCa2+依存性シグナル伝達、膜興奮性、ならびに下流の転写プログラムを形作る可能性がある。プリン作動性シグナル伝達ネットワークを介して、P2X6に関連する活性はカルシウム恒常性、小胞放出、炎症性シグナルの統合といった過程に影響し得る。細胞外ATPの感知異常およびイオノトロピックなプリン作動性シグナル伝達の破綻は、神経炎症性および心血管系の病態生理に関与すると示唆されており、関連する細胞種におけるP2RX6制御機構の解明に向けた研究の動機となっている。

P2X6 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性P2RX6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

P2X6 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における P2RX6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はP2RX6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性P2X6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のP2RX6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるP2X6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびP2RX6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるP2X6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。