Plasmide CRISPR d'Activation (h) P2X2: sc-403517-ACT

Le gène humain **P2RX2** code le récepteur **P2X2** activé par l’ATP, un canal cationique trimérique non sélectif qui médie une entrée rapide de Na⁺/Ca²⁺ en réponse aux nucléotides extracellulaires. La signalisation P2X2 façonne l’excitabilité membranaire, les voies de seconds messagers dépendantes du Ca²⁺ et la transcription dépendante de l’activité dans les neurones et les épithéliums sensoriels, influençant la transmission synaptique, la neurosécrétion et le traitement sensoriel. Ce récepteur purinergique participe à la communication induite par l’ATP lors du stress tissulaire et de l’inflammation, en s’intégrant à des réseaux plus larges de signalisation neuro-immune. Des altérations de la fonction **P2RX2/P2X2** ont été associées à des phénotypes sensoriels et neurologiques, ce qui soutient son étude dans les mécanismes sous-tendant la signalisation auditive et nociceptive, ainsi que dans des voies pertinentes pour les canalopathies.

P2X2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de P2RX2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

P2X2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus P2RX2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription P2RX2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de P2X2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus P2RX2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de P2X2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie P2X2 dans les cellules tumorales présentant une expression de P2RX2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.