OTUD7B Double Nickaseプラスミド (h): sc-403268-NIC

OTUD7B（Cezanne とも呼ばれる）は、OTU ファミリーに属する脱ユビキチン化酵素をコードしており、Lys11 結合および Lys63 結合のユビキチン鎖を編集することで、ユビキチン依存的なシグナル伝達とタンパク質安定性を制御します。E3 リガーゼによるユビキチン化に拮抗することで、OTUD7B はプロテオスタシスや炎症性シグナル伝達（NF-κB 経路の動態や関連する自然免疫応答を含む）に影響を与えます。OTUD7B の活性はサイトカインシグナル伝達ネットワークや細胞のストレス適応の制御とも関連づけられており、免疫調節異常、腫瘍関連炎症、ユビキチン経路の脆弱性に関する研究において重要です。OTUD7B の機能を撹乱することは、転写プログラムや受容体近傍のシグナル伝達複合体における、脱ユビキチン化依存的な制御点を解析するための手段となります。

OTUD7B ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における OTUD7B 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、OTUD7B内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、OTUD7Bの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、OTUD7Bが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。