OTUD4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-412322-ACT

OTUD4は、ヒトの卵巣腫瘍ドメイン（OTU）を含む脱ユビキチン化酵素をコードしており、基質タンパク質からユビキチン鎖を除去することで、ユビキチン依存的なタンパク質のターンオーバーやシグナル伝達を制御します。ユビキチン化の動態を調節することにより、OTUD4はプロテオスタシス、ストレス応答経路、ならびに状況依存的な自然免疫・炎症シグナルの制御に影響を及ぼします。OTUD4活性の変化は、ゲノム安定性や細胞運命決定と交差するユビキチンシグナルネットワークの破綻と関連づけて報告されており、がん生物学や神経生物学における機構研究において重要です。また、その脱ユビキチン化という酵素機能により、ユビキチン修飾の再構成と転写プログラムの間の経路クロストークを解明するうえで、有用な結節点として位置づけられます。

OTUD4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性OTUD4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

OTUD4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における OTUD4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はOTUD4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性OTUD4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のOTUD4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるOTUD4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびOTUD4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるOTUD4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。