Plasmide CRISPR/Cas9 KO OTUB2 (h): sc-413099

Présentation

OTUB2 (OTU déubiquitinase, ubiquitin aldéhyde binding 2) code une déubiquitinase cystéine-protéase qui modifie les signaux ubiquitine afin de réguler la stabilité des protéines et l’amplitude de la signalisation. En clivant préférentiellement certains types de liaisons au sein des chaînes d’ubiquitine, OTUB2 influence des voies dépendantes de l’ubiquitine qui contrôlent la protéostasie, les réponses aux dommages de l’ADN et des cascades de signalisation adaptatives au stress. Une activité altérée d’OTUB2 a été associée à une homéostasie de l’ubiquitine dérégulée, observée dans de nombreux contextes pathologiques, notamment des programmes de signalisation oncogénique et la physiopathologie inflammatoire. Ainsi, OTUB2 est fréquemment étudiée pour son impact sur le dialogue entre l’ubiquitination, le contrôle transcriptionnel et les décisions cellulaires de survie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO OTUB2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène OTUB2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du OTUB2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert OTUB2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine OTUB2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en OTUB2 pour l'étude de la signalisation de OTUB2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de OTUB2 essentiels à la fonction de OTUB2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de OTUB2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le OTUB2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le OTUB2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus OTUB2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le OTUB2 plasmide HDR (h) et le OTUB2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie OTUB2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles OTUB2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.