Plasmide CRISPR d'Activation (h) OSM: sc-404957-ACT

L’oncostatine M (OSM) est une cytokine pléiotrope de la famille de l’IL‑6 qui transmet ses signaux principalement via OSMR ou LIFR, en association avec gp130, afin de réguler l’inflammation, le remodelage tissulaire et le dialogue entre les cellules hématopoïétiques et stromales. La stimulation par l’OSM active les voies JAK/STAT (notamment STAT3), MAPK/ERK et PI3K/AKT, reprogrammant l’expression génique de manière à influencer la prolifération et la différenciation cellulaires, le renouvellement de la matrice extracellulaire et la fonction de barrière. En biologie humaine, une activité dérégulée de l’OSM a été associée à des microenvironnements inflammatoires chroniques et à un remodelage fibreux, avec une pertinence supplémentaire pour le stroma associé aux tumeurs, la signalisation angiogénique et le recrutement de cellules immunitaires. Ces caractéristiques font de l’OSM un nœud d’intérêt pour étudier les réseaux transcriptionnels induits par les cytokines, la signalisation paracrine et le couplage des voies de signalisation entre compartiments immunitaires et non immunitaires.

OSM Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de OSM sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

OSM Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus OSM dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription OSM, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de OSM. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus OSM natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de OSM au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie OSM dans les cellules tumorales présentant une expression de OSM silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.