Orexin-A Double Nickase Plasmid (h): sc-400357-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Orexin-A Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Orexin-A Double-Nickase-Plasmid (h) und Orexin-A Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HCRT abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Orexin-A: sc-80263
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Orexin-A Double Nickase Plasmid (h) | sc-400357-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Orexin-A Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400357-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HCRT kodiert Prepro-Orexin, das proteolytisch zu Orexin‑A verarbeitet wird – einem Neuropeptid, das hauptsächlich von Neuronen des Hypothalamus gebildet wird und Wachheit, die Stabilität des Schlaf‑Wach‑Rhythmus, die Energiehomöostase sowie motivationsgesteuerte Verhaltensweisen koordiniert. Orexin‑A signalisiert über die G‑Protein‑gekoppelten Rezeptoren OX1R und OX2R und aktiviert dabei Ca²⁺‑Flüsse, MAPK/ERK‑ sowie cAMP/PKA‑Signalwege, wodurch die Neurotransmitterfreisetzung in monoaminergen und cholinergen Schaltkreisen moduliert wird. Dieses Signalnetzwerk beeinflusst Nahrungsaufnahme und Stressreaktivität über die Integration metabolischer und zirkadianer Hinweise in Hypothalamus und Hirnstamm. Eine veränderte HCRT/Orexin‑Aktivität wurde mit Schlaf‑Wach‑Störungen, adipositasassoziierten Phänotypen und neuropsychiatrischen Merkmalen in Verbindung gebracht, was HCRT für mechanistische Studien zur Regulation neuronaler Schaltkreise relevant macht.
Orexin-A Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HCRT-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HCRT abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HCRT-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HCRT-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.