Orai1CRISPR激活质粒(h): sc-400901-ACT

ORAI1 编码 Orai1 蛋白，后者是钙释放激活钙（CRAC）通道的成孔亚基。在内质网 Ca²⁺ 储备耗竭后，CRAC 通道介导储存操纵性钙进入（SOCE）。通过实现持续的 Ca²⁺ 内流，Orai1 调控下游的 Ca²⁺ 依赖性转录程序（如 NFAT 信号通路），从而影响淋巴细胞活化、细胞因子产生以及更广泛的免疫细胞效应功能。ORAI1 活性还可通过 Ca²⁺ 敏感通路与离子稳态网络，影响多种细胞类型的增殖、迁移与分泌。ORAI1/SOCE 信号失调与免疫功能异常表型及炎症相关病理生物学有关，因此可作为细胞信号研究中的关键机制节点。

Orai1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ORAI1的表达。

Orai1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的ORAI1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于ORAI1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Orai1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的ORAI1位点，并能够研究内源性位点上依赖于Orai1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ORAI1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Orai1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。