OR2A1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417340-ACT

O OR2A1 humano codifica um receptor olfatório da família de GPCR classe A que se acopla à sinalização da proteína G olfatória para regular a transdução sensorial evocada por odorantes. Após a ligação do ligante, o OR2A1 tipicamente ativa vias de adenilato ciclase–AMPc para modular a atividade de canais iónicos regulados por nucleótidos cíclicos e programas downstream de excitabilidade neuronal. Embora seja melhor caracterizado no epitélio olfatório, transcritos de receptores olfatórios foram relatados numa variedade de tecidos periféricos, o que tem motivado estudos sobre sinalização ectópica de GPCR e regulação transcricional dependente do contexto. Padrões de expressão alterados entre tecidos e estados de doença tornaram o OR2A1 um gene marcador útil para investigar a regulação de genes de GPCR sensoriais e fenótipos relacionados com quimiossensação em modelos celulares.

OR2A1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de OR2A1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

OR2A1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus OR2A1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição OR2A1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de OR2A1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus OR2A1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de OR2A1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via OR2A1 em células tumorais com expressão de OR2A1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.