Plásmido Doble Nickase (h) OPG/Osteoprotegerin: sc-400497-NIC

TNFRSF11B codifica la osteoprotegerina (OPG), un receptor señuelo secretado de la superfamilia de receptores del TNF que se une a RANKL (TNFSF11) y a TRAIL (TNFSF10), modulando así la disponibilidad de estos ligandos y la señalización aguas abajo. Al antagonizar las interacciones RANK–RANKL, la OPG regula la diferenciación y la actividad de los osteoclastos, integrándose con las salidas de las vías NF-κB y MAPK que controlan la remodelación ósea y la comunicación cruzada con el sistema inmunitario. Más allá de la biología esquelética, la OPG está implicada en la calcificación vascular y en la señalización entre endotelio y músculo liso, lo que refleja su papel en la interfaz entre la inflamación y la homeostasis tisular. La expresión desregulada de TNFRSF11B o un equilibrio alterado OPG/RANKL se ha asociado con fenotipos de densidad ósea, procesos osteolíticos y mecanismos de enfermedad vascular calcificada relevantes para la investigación traslacional.

OPG/Osteoprotegerin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TNFRSF11B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TNFRSF11B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TNFRSF11B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TNFRSF11B alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.