oligophrenin-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403694-ACT

OPHN1 codifica a oligofrenina-1, uma proteína ativadora de GTPase da família Rho que reduz a sinalização de RhoA, Rac1 e Cdc42 para coordenar a remodelação do citoesqueleto de actina, o tráfego de membranas e a estrutura sináptica. Por meio da modulação das vias da família Rho, a oligofrenina-1 influencia o crescimento de neuritos, a morfogênese das espinhas dendríticas e processos endocíticos que sustentam a conectividade e a plasticidade neuronais. Variantes de perda de função em OPHN1 estão associadas a fenótipos de neurodesenvolvimento ligados ao X, incluindo deficiência intelectual com anomalias estruturais cerebrais, destacando sua importância na formação de circuitos. Essas características tornam OPHN1 um alvo útil para estudar a dinâmica do citoesqueleto e redes de sinalização que acoplam pequenas GTPases à função sináptica.

oligophrenin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de OPHN1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

oligophrenin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus OPHN1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição OPHN1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de oligophrenin-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus OPHN1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de oligophrenin-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via oligophrenin-1 em células tumorais com expressão de OPHN1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.