OLIG2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400670-ACT

OLIG2 は、塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックス（bHLH）型の転写因子をコードし、神経系譜の指定を統合的に制御します。特に、神経管腹側のパターニングや、オリゴデンドロサイト前駆細胞および運動ニューロンへの分化プログラムのコミットメントにおいて重要な役割を担います。OLIG2 は、発生段階に特異的な転写ネットワークを介して SHH や Notch などの発生シグナル伝達経路と連携し、前駆細胞の増殖、分化のタイミング、グリア系譜の運命決定を調節します。OLIG2 発現の異常は、神経発達異常や脳腫瘍の生物学の文脈でしばしば研究されており、細胞状態の制御や増殖能の変化と関連づけられています。系譜を規定する制御因子として、OLIG2 は、神経幹／前駆細胞の挙動やオリゴデンドログリアの成熟を支配する遺伝子制御回路を解明するうえでの重要な結節点となります。

OLIG2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性OLIG2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

OLIG2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における OLIG2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はOLIG2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性OLIG2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のOLIG2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるOLIG2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびOLIG2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるOLIG2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。