Olfr291 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-434560-ACT

Olfr291はマウスにおける嗅覚受容体をコードする遺伝子で、クラスA Gタンパク質共役受容体（GPCR）スーパーファミリーに属し、通常は嗅上皮の感覚ニューロンに発現しています。リガンドが結合すると、嗅覚受容体はGタンパク質シグナル伝達に共役し、アデニル酸シクラーゼを活性化してcAMPを増加させ、環状ヌクレオチド作動性イオンチャネルの活性を調節することで、神経細胞の興奮性や匂い誘発応答に影響を与えます。感覚生物学の枠を超えて、嗅覚受容体の一部が多様な組織で異所性に発現することも報告されており、非典型的な文脈におけるGPCR連関シグナル伝達、転写プログラム、細胞状態の制御を研究する根拠となっています。したがってOlfr291は、化学感覚コーディング、GPCR経路ダイナミクス、ならびに受容体発現の変化が疾患モデルにおける細胞表現型の変容とどのように関連し得るかという機構の研究に有用です。

Olfr291 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Olfr291の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Olfr291 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Olfr291 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はOlfr291転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Olfr291の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のOlfr291遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるOlfr291依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびOlfr291発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるOlfr291経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。